巴拿马运河的是北美洲与南美洲的分界线。巴拿马运河位于中美洲国家巴拿马，横穿巴拿马地峡，连接太平洋和大西洋，是重要的航运要道，被誉为世界七大工程奇迹之一的世界桥梁。巴拿马运河由巴拿马拥有和管理，属于水闸式运河。从一侧的海岸线到另一侧海岸线长度约为65千米。
巴拿马运河位于北纬9°，北美大陆分水岭在该处剧降至其最低点之一。运河并不是如一般人所想像的由东向西横过地峡。而是在大西洋一侧科隆的入口向南通过加通水闸进到加通湖的最宽处，然后急转向东，沿一条大致向东南的航道到达太平洋一侧的巴拿马湾。
其位于巴尔博亚附近之终点在科隆附近之起点的东南，相距约40千米。与运河平行的交通设施有巴拿马运河铁路和博伊德罗斯福公路。